1、2LifeTechnologies网站 LifeTechnologies公司有个非常实用的在线shRNA设计软件，操作非常方便，而且设计出来的shRNA不再需要到NCBI上Blast，直接可以用的首先打开网站，在TargetDesignOptions处选中shRNA，以Fli1为例，输入Accessionnumber或Nucleotidesequence，其他条件不变下拉到底点击RNAiDesign，然后出现推荐的10。

2、Sense GATCCCCCTTCTGACATCTCCTACATCTCGAGATGTAGGAGATGTCAGAAGGGTTTTTG Antisense AATTCAAAAACCCTTCTGACATCTCCTACATCTCGAGATGTAGGAGATGTCAGAAGGGG 2 Life Technologies网站 Life Technologies公司有个非常实用的在线shRNA设计软件，操作非常方便，而且设计出来的shRNA不再需要到NCBI上Blast，直接可以用的首。

3、应该不是输入错误GATCC是故意设计的，这样正确连接上shRNA的质粒就不会被BalII切断，可以以此来验证shRNA有没有被连接上自连的质粒会被BglII切断成linear的通过跑胶就能看出区别。