CRISPRCas9实验流程包括sgRNA设计，这一关键步骤确保实验的成功设计原则主要聚焦于20nt靶点的II型CRISPR系统如SpCas9，确保sgRNA序列的碱基组成基因特异性模板序列前遵循NGGN为任意核苷酸的PAM序列规则避免sgRNA序列以4个以上的T结尾，同时保持GC%含量在30%70%力求sgRNA与Ontarget和Off。

sgRNA的设计过程包括NCBI基因信息检索特定编辑区域选择同源区识别转录本序列下载与分析共外显子识别sgRNA序列输入至设计网站评分与脱靶位点分析，最终获得设计好的sgRNA序列，并送至合成公司进行合成构建sgRNA质粒采用LentiCRISPRV2载体，该载体含有两个BsmBI酶切位点，通过BsmBI内切酶I打开所需。

碧基Cas9平台专注于基因靶向操作，提供专业的基因编辑服务，包括基因敲除基因突变等他们拥有一流的技术团队和先进的设备，可以满足客户的不同需求，无论是科研机构还是制药公司，都可以在这里找到合适的解决方案使用CRISPRCas9技术进行基因敲除的过程大致分为几个步骤首先，需要设计合适的gRNA序列，确保。

以参与研究的途径或感兴趣的表型默克sigma aldrich公司提供了多种CRISPR基因组编辑工具，包括全功能即用型CAS9和指导RNAgRNA表达质粒，CRISPR配对切口酶，仅含纯化RNA的导向RNA，CRISPR慢病毒，以及CRISPR阳性和阴性对照这些工具被设计为具有特定靶向性和稳定切割活性，易于获取和使用。

根据目的基因选择待敲除靶基因位点找出敲除目的基因的外显子 首先在第一个起始密码子 ATG 之后的外显子中找出特异性高的上下游序列以小鼠基因 Th 为例在 pubmed 上找到基因的 mRNA 的 CDS 区，选择第二个外显子作为敲除位点02 设计成对 sgRNA 序列 打开网站 。

凭借设计简单高效和低成本，CRISPRCas9系统是目前基因编辑的热门工具系统主要包括两个元件Cas9核酸内切酶和向导RNAsgRNA其中，sgRNA能够识别靶DNA序列中保守的前间区序列邻近基序PAM，通过与Cas9蛋白结合，引导Cas9核酸内切酶定点切割靶向DNA但若sgRNA与基因组上其他位置即非靶序列结合，则。

CRISPR设计工具提供了所需的所有寡核苷酸和引物的序列i制备sgRNA结构，ii分析目标修饰效率，iii评估潜在靶外位点的切割值得注意的是，由于表达sgRNA的U6 RNA聚合酶III启动子更倾向于将鸟嘌呤G核苷酸作为其转录本的第一个碱基，因此在sgRNA的5 #39端附加了一个额外的G，而20nt引导序列并不以。

CRISPRai技术在CRISPR Screen中的应用广泛，可用于功能基因组学研究药物靶点发现和基因交互网络分析通过系统性地调控基因表达，识别对细胞功能至关重要的基因，发现新的药物靶点，以及研究基因间的相互作用珠海舒桐医疗科技有限公司在基因编辑领域深耕多年，致力于研发和优化CRISPR系统，提供sgRNA设计。